大鼠腎小管上皮細(xì)胞 RRTEpiC

大鼠腎小管上皮細(xì)胞是從人出生2天大鼠的腎中分離得到的，一代凍存，冰凍運(yùn)輸。每管細(xì)胞密度超過5×10^5/ml。該細(xì)胞可通過細(xì)胞因子-18、-19和波形蛋白特異性抗體的免疫熒光進(jìn)行鑒定。本細(xì)胞經(jīng)檢測不含支原體、細(xì)菌、酵母菌和真菌。如采用ScienCell實(shí)驗(yàn)室特制的培養(yǎng)基，可保證此細(xì)胞繼續(xù)增殖。然而，由于該細(xì)胞傳代后可限制膨脹能力與衰老，故不建議將此細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)。

取材：1.腎小管節(jié)段的分離(機(jī)械網(wǎng)篩濾過法)：

①取 Wistar 大鼠斷頸法處死，立即置入碘伏液中浸泡 5 分鐘。

②將大鼠轉(zhuǎn)移入超凈工作臺，取腰部切口迅速取出腎臟，置于盛有生理鹽水的培養(yǎng)皿中清洗并除去包膜和腎蒂組織。

③取皮質(zhì)置于80目篩網(wǎng)上，剪碎成1-2mm3大小組織塊，網(wǎng)下放盛有少量生理鹽水的培養(yǎng)皿。

④用玻璃注射器內(nèi)芯于80目網(wǎng)上充分研磨組織。

⑤收集 80 目網(wǎng)下液體轉(zhuǎn)移至 100 網(wǎng)篩上，用生理鹽水沖洗。

⑥將100目網(wǎng)上組織用生理鹽水沖洗入另一培養(yǎng)皿中，收集置入離心管中。1500 轉(zhuǎn)/分鐘離心5分鐘，棄去上清。

2 腎小管節(jié)段的消化及培養(yǎng)

①用1.5ml 0.25%胰蛋白酶重懸沉淀，37℃溫箱中消化約10分鐘。

②加入3ml(雙倍量)含有10%胎牛血清RPMI1640中止消化，1500 轉(zhuǎn)/分離心8分鐘，棄上清。

③加入約3ml RPMI1640 懸浮沉淀，并用吸管充分吹打混勻，接種于培養(yǎng)瓶中。

④分離腎小管節(jié)段接種于培養(yǎng)瓶后，第一天加入少量培養(yǎng)基，置入37℃,5%CO2孵育箱中靜置培養(yǎng)。

⑤培養(yǎng)過夜后，第二天加入足量的培養(yǎng)基，靜置培養(yǎng)。

⑥培養(yǎng) 72 小時(shí)后首次換液，以后每兩天換液一次。

⑦約第六到七天細(xì)胞生長基本融合成單層。